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    作者:admin 浏览量:110 来源:本站 时间:2023-09-24 13:16:26

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    一旦证实由突变鉴定的特定基因涉及感兴趣的代谢过程,许多探索性实验就变得可行。 在依赖于相似表型鉴定的各种突变之后,可以在分子水平上构建工作模型。 研究可以从确定基因如何催化目标以及环境相关因素如何调节开始。 假设已经确定了该代谢过程的基因,因此可以设计分子工具(PCR探针、抗体)来监测该过程是否在给定环境中发生。 一旦基因的操作元件(例如启动子)已被鉴定,工程细菌可被设计成表达该基因。 例如,将感兴趣基因的启动子克隆到质粒中,并启动可通过荧光或比色检测检测检测的蛋白质的表达(gfp的表达,其编码绿色荧光蛋白[GFP];或lacZ,其编码B-半乳糖苷酶)。 在实验室中,通过调节各种环境因素,结合荧光定量或B-半乳糖苷酶活性,可以准确检测靶基因表达。

    基因融合可以检测转录和翻译。 后者报告基因与编码目的蛋白的基因融合,使得当其表达时,其携带的报告基因标签也表达。 根据标签的类型,可以在活细胞中直接检测翻译的融合产物

    *后,基因产物的生物化学性质可以在野生细菌或其他克隆能够过表达的基因。在研究的这个阶段,许多重要的机械学问题都可以得到回答。例如,一旦蛋白质纯化方法被开发出来,晶体结构就可以被研究来确定细胞中其他相关蛋白质的性质。

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